引物是从3到5还是5到3图解（引物）

你们好，最近小时发现有诸多的小伙伴们对于引物是从3到5还是5到3图解，引物这个问题都颇为感兴趣的，今天小活为大家梳理了下，一起往下看看吧。

1、 首先，获取你要设计的目标基因引物。这里我用一个GFP基因给大家解释一下。将目标基因保存在txt文档中，或者直接复制然后在DNAMAN中创建新文档进行复制。

2、 下面是我们要设计的GFP基因序列引物。

3、 Open DNAMAN and select Primer-Load Primer-Enter from the menu.

4、 从上一步的目的基因序列开始复制粘贴约20个碱基(引物长度应在15-30bp之间，一般为18-27bp)。比如我们来试试前20个基数是否合适。

5、 复制粘贴20个碱基ATTGATGTGATATCTCCACT，点击确定。

6、 再次单击引物并选择熔化温度以打开对话框。这里可以看到你的碱基序列，编号和Thermo，也就是Tm值，也就是溶解温度。Tm值一般在55到70之间。

7、 PCR仪的退火温度一般设置为比引物的Tm低5(但我们一般设置为55，所以Tm值在60左右)。

8、 从上图可以看出，我们20个碱基的Tm值只有49度，明显太低了，碱基数需要增加。让我们把前24个碱基贴进去。点击下面的显示Tm可以看到引物的Tm值，发现是60.3度，非常合适。

9、 就用这个。于是设计了正向引物，保留这24个碱基序列。

以上就是引物这篇文章的一些介绍，希望对大家有所帮助。

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